Метод определения активности церулоплазмина

Материалы по биологии » Активность плаценты при гестозах » Метод определения активности церулоплазмина

Активность церулоплазмина определяли модифицированным методом Ревина, который базируется на окислении p-фенилендиамина при участии этого фермента. Ферментативную реакцию останавливают добавлением фтористого натрия. По оптической плотности образующихся продуктов судят о концентрации церулоплазмина.

В обычные химические пробирки вносили по 0,1 мл гомогената. В одну из пробирок, служащую контрольной, добавляли 2 мл раствора фтористого натрия (с целью инактивации ферментативной активности церулоплазмина). Затем во все пробирки помещали по 8 мл ацетатного буфера и по 1 мл раствора p-фенилендиамина (используемого в качестве субстрата). Пробирки встряхивали и ставили на 1ч в водяную баню с температурой +37˚С. После инкубации во все пробирки, за исключением контрольной, доливали по 2 мл раствора фтористого натрия. Содержимое пробирок перемешивали и переносили в холодильник, где выдерживали в течение 30 мин при +4˚С. Пробы колориметрировали на ФЭКе с зеленым светофильтром (530нм) в кюветах с шириной слоя 10 мм. Результаты сравнивали с данными контрольной пробы (бледно-розовая окраска). Умножали значения оптической плотности на коэффициент пересчета 875, получали величину концентрации церулоплазмина в мг/л.


Прочие статьи:

Выращивание крупного посадочного материала массой 500 г
Выращивание крупного посадочного материала массой 500 г проводится в бассейнах типа ИЦА-2 или лотках. Содержание растворенного в воде кислорода должно быть не ниже 7 мг/л. Расход воды устанавливается в соответствии с оптимальным содержани ...

Загрязнение природной среды и роль растений в ее защите. Охрана растительного покрова
Загрязнение среды промышленными отходами, выхлопными газами автомашин, бытовым мусором, ядохимикатами, а также распашка степей, осушение болот, непомерная рубка леса и гибель его от пожара — все это приводит к серьезным нарушениям в приро ...

Хромосомный уровень организации наследственного материала. Уровни упаковки генетического материала эукариот
Таким образом, уровни упаковки ДНК следующие: 1) Нуклеосомный (2,5 оборота двуспиральной ДНК вокруг восьми молекул гистоновых белков). 2) Супернуклеосомный - хроматиновая спираль (хромонема). 3) Хроматидный - спирализованная хромонема. ...

Разделы