В качестве первичного материала для введения в культуру in vitro нами были использованы изолированные зародыши.Предварительно обрабатывали их 95%-ным этиловым спиртом в течение 50-60 секунд. В качестве стерилизатора использовали 3%-ый «Лизоформин» (действующие вещества: глутаровый альдегид, глиоксаль и дидецилдиметиламмоний хлорид). «Лизоформин» применяется для дезинфекции медицинских изделий и обладает не только бактерицидными, фунгицидными и спороцидными, но и вирулицидными свойствами, что является важным моментом для получения стерильных эксплантов.

О О

С–СН2–СН2–СН2–С

О

О

Н Н

Глутаровый альдегид С–С Сl-

Н Н С10Н4 + СН3

Cl

Глиоксаль N

С10Н4 СН3

дидецилдиметиламмоний хлорид

Схема 1. Молекулярная структура действующих веществ Лизоформина.

Оптимальное время стерилизации 7-10 мин. Поверхностно простерилизованные и промытые семена высаживали в чашки Петри на агаризованную питательную среду Мурасиге – Скуга без добавления фитогормонов. Основная часть семян прорастала на 7 – 10-е сутки, остальные на 13 – 15 сутки с момента помещения их на питательную среду. Полученные проростки в асептических условиях расчленяли на фрагменты и переносили для роста и размножения на питательную среду Мурасиге – Скуга с добавлением 0.5 мг/л 6-БАП.

Для оптимизации состава среды на этапе микроразмножения к питательной среде, содержащей минеральные соли по Мурасиге и Скугу, добавляли в различных концентрациях 6-БАП (0.1; 0.5; 1.0 мг/л), зеатин (0.1; 0.5; 1.0 мг/л), кинетин (1.0; 2.0; 5.0 мг/л) и для вытягивания побегов гибберелловую кислоту (0.2 и 0.4 мг/л). При этом снимались следующие показатели:

1. Коэффициент размножения – количество растений, развившихся из одного экспланта;

2. Количество аномальных (витрифицированных) растений;

3. Количество листьев;

4. Высота растения.

Прочие статьи:

Морфологические особенности и свойства чайного гриба
Первое научное описание составил в 1913 году германский миколог Линдау. За свое сходство с медузой организм, плавающий на поверхности жидкости, назвали «медузомицетом». Ничего общего с медузой он, конечно, не имеет. Более того, это и не г ...

Методы стерилизации
Стерилизация или обеспложивание (от лат. sterilis - бесплодный), это полное уничтожение клеток микроорганизмов в питательных средах, посуде и пр. Известно несколько методов стерилизации. Чаще всего применяют стерилизацию нагреванием. 1. ...

Ключевые моменты
– В древнейшем океане не могло быть никакого “первичного бульона” из готовых органических веществ; – Жизнь возникла не в океане, а в пресноводном большом проточном озере; – Зарождающаяся жизнь с самого начала должна была непрерывно подп ...