В качестве первичного материала для введения в культуру in vitro нами были использованы изолированные зародыши.Предварительно обрабатывали их 95%-ным этиловым спиртом в течение 50-60 секунд. В качестве стерилизатора использовали 3%-ый «Лизоформин» (действующие вещества: глутаровый альдегид, глиоксаль и дидецилдиметиламмоний хлорид). «Лизоформин» применяется для дезинфекции медицинских изделий и обладает не только бактерицидными, фунгицидными и спороцидными, но и вирулицидными свойствами, что является важным моментом для получения стерильных эксплантов.
О О
С–СН2–СН2–СН2–С
|
|
Глутаровый альдегид С–С Сl-
Н Н С10Н4 + СН3
|
Глиоксаль N
С10Н4 СН3
дидецилдиметиламмоний хлорид
Схема 1. Молекулярная структура действующих веществ Лизоформина.
Оптимальное время стерилизации 7-10 мин. Поверхностно простерилизованные и промытые семена высаживали в чашки Петри на агаризованную питательную среду Мурасиге – Скуга без добавления фитогормонов. Основная часть семян прорастала на 7 – 10-е сутки, остальные на 13 – 15 сутки с момента помещения их на питательную среду. Полученные проростки в асептических условиях расчленяли на фрагменты и переносили для роста и размножения на питательную среду Мурасиге – Скуга с добавлением 0.5 мг/л 6-БАП.
Для оптимизации состава среды на этапе микроразмножения к питательной среде, содержащей минеральные соли по Мурасиге и Скугу, добавляли в различных концентрациях 6-БАП (0.1; 0.5; 1.0 мг/л), зеатин (0.1; 0.5; 1.0 мг/л), кинетин (1.0; 2.0; 5.0 мг/л) и для вытягивания побегов гибберелловую кислоту (0.2 и 0.4 мг/л). При этом снимались следующие показатели:
1. Коэффициент размножения – количество растений, развившихся из одного экспланта;
2. Количество аномальных (витрифицированных) растений;
3. Количество листьев;
4. Высота растения.
Прочие статьи:
Влияние биологич факторов на микроорган. Антибиотики. Определение
чувствительности микроорган к антибиотикам. Дизбактериоз и способы его
устранения
Действие биологических факторов проявляется в антагонизме микробов, когда продукты жизнедеятельностиодних микробов обусловливают гибель других. Антибиотики - разновидность химиотерапевтических препаратов - хим в-ва, выделяемые некоторыми ...
Подотряд церациевидные, или глубоководные удильщики (Ceratioidei)
Этот подотряд, включающий 11 семейств, 40 родов и около 120 видов, внешне отличается от остальных удильщикообразных прежде всего отсутствием брюшных плавников. В то время как другие удильщикообразные обитают на дне или, в немногих случаях ...
Флуорохромы и флуорохромирование
У подавляющего большинства биологических объектов их собственная неяркая люминесценция не позволяет проводить люминесцентно-микроскопические исследования и для избирательного выявления определённых структур применяют люминесцентные красит ...