Методы определения аффинности антител
Страница 2

Материалы по биологии » Аффинность антител и кинетика реакций » Методы определения аффинности антител

Таблица 1. Методы определения аффинности антител

Методы

Используемые антигены

Равновесный диализ Осаждение глобулиновой фракции сульфатом аммония

Осаждение углем, модифицированным декстраном

Осаждение антиглобулинами

Гельфильтрация, разделение по молекулярной массе

Тушение флуоресценции

Усиление флуоресценции Поляризация флуоресценции Спектральные методы Тушение биолюминесценции

Гаптены, диализуемые антигены Гаптены, антигены, растворимые

при 50%-ном насыщении сульфатом

аммония Гаптены

Гаптеиы, белки, полисахариды Гаптены, белковые полисахариды

Гаптены и антигены со специфическими флуоресцентными свойствами Гаптеиы, белки Гаптены, белки

Гаптены, связанные с красителем Гаптены, белки

Метод деполяризации флуоресценции основан на измерении поляризации флуоресценции антигена, меченного красителем, до взаимодействия с антителами и после комплексообразования. Поляризация флуоресценции определяется молекулярным объемом частицы и степенью ее асимметрии. Комплексообразование антигена с антителом сопровождается резким изменением поляризации флуоресценции красителя, который играт роль метки антигена или антитела. Предел обнаружения антигена этими методами достаточно мал. Недостатками методов, основанных на измерении флуоресценции, являются необходимость работы с препаратами очищенных антител и строгие требования к структуре изучаемых антигенов. Вследствие этого флуоресцентные методы не являются универсальными и могут быть применены для ограниченной группы антигенов.

Методы тушения биолюминесценции основаны на использовании в качестве маркера АТР, пришитой к' молекуле антигена. В составе такого комплекса молекула АТР сохраняет активность в реакции биолюминесценции, катализируемой светлячковой люциферазой. При добавлении антител образуется комплекс с антигеном, в котором молекула АТР становится недоступной ферменту, в результате чего ингибируется реакция биолюминесценции. Указанный метод обладает высокой чувствительностью, что позволяет измерять константы ассоциации до 10-12 М.

Перечень экспериментальных методов определения аффинности взаимодействия антиген — антитело приведен в табл. 1.

Страницы: 1 2 


Прочие статьи:

Классификация энергетических процессов
Энергетические процессы в нефототрофных организмах подразделяются на аэробные и анаэробные в зависимости от участия или не участия в них молекулярного кислорода. Аэробное дыхание – энергетический процесс, при котором конечным акцептором ...

Дефицит кислорода на древнейшей Земле. Невозможность “первичного бульона”
Вначале был только водород, более сложные химические элементы возникли только во время взрывов сверхновых звезд. Слой новых элементов в такой звезде бывает похож на тонкую скорлупку, так что, в образовавшейся после взрыва туманности водор ...

Заболевания сосудов поясничного отдела спинного мозга
Данный тип заболеваний встречается достаточно часто. Хронические ишемические поражения спинного мозга описываются под названием дискциркуляторной (сосудистой) миелопатии, или хронической спинальной сосудистой недостаточности. Они характе ...

Разделы