Методы определения аффинности антител
Страница 2

Материалы по биологии » Аффинность антител и кинетика реакций » Методы определения аффинности антител

Таблица 1. Методы определения аффинности антител

Методы

Используемые антигены

Равновесный диализ Осаждение глобулиновой фракции сульфатом аммония

Осаждение углем, модифицированным декстраном

Осаждение антиглобулинами

Гельфильтрация, разделение по молекулярной массе

Тушение флуоресценции

Усиление флуоресценции Поляризация флуоресценции Спектральные методы Тушение биолюминесценции

Гаптены, диализуемые антигены Гаптены, антигены, растворимые

при 50%-ном насыщении сульфатом

аммония Гаптены

Гаптеиы, белки, полисахариды Гаптены, белковые полисахариды

Гаптены и антигены со специфическими флуоресцентными свойствами Гаптеиы, белки Гаптены, белки

Гаптены, связанные с красителем Гаптены, белки

Метод деполяризации флуоресценции основан на измерении поляризации флуоресценции антигена, меченного красителем, до взаимодействия с антителами и после комплексообразования. Поляризация флуоресценции определяется молекулярным объемом частицы и степенью ее асимметрии. Комплексообразование антигена с антителом сопровождается резким изменением поляризации флуоресценции красителя, который играт роль метки антигена или антитела. Предел обнаружения антигена этими методами достаточно мал. Недостатками методов, основанных на измерении флуоресценции, являются необходимость работы с препаратами очищенных антител и строгие требования к структуре изучаемых антигенов. Вследствие этого флуоресцентные методы не являются универсальными и могут быть применены для ограниченной группы антигенов.

Методы тушения биолюминесценции основаны на использовании в качестве маркера АТР, пришитой к' молекуле антигена. В составе такого комплекса молекула АТР сохраняет активность в реакции биолюминесценции, катализируемой светлячковой люциферазой. При добавлении антител образуется комплекс с антигеном, в котором молекула АТР становится недоступной ферменту, в результате чего ингибируется реакция биолюминесценции. Указанный метод обладает высокой чувствительностью, что позволяет измерять константы ассоциации до 10-12 М.

Перечень экспериментальных методов определения аффинности взаимодействия антиген — антитело приведен в табл. 1.

Страницы: 1 2 


Прочие статьи:

Сходство и отличие человека и животных
В науке накоплено достаточно большое число фактов, свидетельствующих о поразительном сходстве человека и животных, что позволяет сделать вывод о единстве происхождения живых существ. Элементный состав живых организмов на Земле одинаков, т ...

Наследственность, сцепленная с полом
Половые различия раздельнополых организмов связаны с различиями между их хромосомами, однако они по-разному проявляются у организмов разных видов. У насекомых рода Protenor различия между хромосомами мужских и женских особей заключаются ...

Современная теория химической эволюции
Химическая эволюция или пребиотическая эволюция - первый этап эволюции жизни, в ходе которого органические, пребиотические вещества возникли из неорганических молекул под влиянием внешних энергетических и селекционных факторов и в силу ра ...

Разделы