Обсуждение результатов
Страница 2

Схема синтеза 2Н-меченого инозина разрабатывалась с учетом способности метилотрофных бактерий синтезировать большое количество белка (выход 50% от веса сухого вещества), 15-17% полисахаридов, 10-12% липидов (в основном, фосфолипиды) и 18% зольных веществ [34]. Гидролиз биомассы проводили автоклавированием в 0.5 н. 2НCl (в 2Н2O), чтобы обеспечить высокие выходы этих соединений и минимизировать реакции обратного (1Н-2Н) обмена в аминокислотных остатках молекул белков. Качественный и количественный состав ароматических аминокислот метилотрофного гидролизата изучали в дейтерированной среде М9 на катионообменной колонке Biotronic LC-5001 (ФРГ) с сульфированной смолой UR-30, а уровни дейтерированности молекул масс-спектрометрией электронного удара метиловых эфиров N-диметиламинонафталин-5-сульфонильных производных аминокислот. Гидролизат представлен пятнадцатью идентифицированными аминокислотами (за исключением пролина, который детектировался при 440 нм) при выходах аминокислот, сопоставимом с потребностями штамма в источниках углерода и аминного азота (табл. 2). При этом индикатором, определяющим высокую эффективность включения дейтерия в синтезируемый продукт служит высокий уровень дейтерированности молекул аминокислот, который варьирует от 49% для лейцина/изолейцина до 97.5% для аланина (табл. 2).

Биосинтетические характеристики штамма B. subtilis снимали в протонированной дрожжевой среде с обычной водой и синтетической тяжеловодородной среде с 2Н2О и 2% 2Н-меченым метилотрофным гидролизатом B. methylicum (рис. 3). Отмечена корреляция в характере изменения ростовых динамик (рис. 3, 1а, 2а), выхода инозина (рис. 3, 1б, 2б) и ассимиляции глюкозы (рис. 3, 1в, 2в). Максимальный выход инозина (17 г/л) зафиксирован в опыте 1б (рис. 3, 1б) на протонированной среде при уровне ассимилируемой глюкозы 10 г/л (рис. 3, 1в). На тяжеловодородной среде выход инозина снижался в 4.4 (3.9 г/л) (рис. 3, 2б), а уровень ассимиляции глюкозы в 4 раза, о чем свидетельствует 40 г/л неассимилируемой глюкозы в КЖ (рис. 3, 2в).

Таблица 2.

Аминокислотный состав метилотрофного гидролизата и уровни дейтерированности молекул

Аминокислота

Выход, % от сухого веса 1 г биомассы

Величина молекулярного иона Мr

Количество включенных атомов дейтерия

в углеродный скелет молекулы

Уровень дейтерированности молекул, % от общего количества атомов водорода

Глицин

9.69

324

2

90.0

Аланин

13.98

340

4

97.5

Валин

3.74

369

4

50.0

Лейцин

7.33

383

5

49.0

Изолейцин

3.64

383

5

49.0

Фенилаланин

3.94

420

8

95.0

Тирозин

1.82

669

7

92.8

Серин

4.90

355

3

86.6

Треонин

5.51

не детектировался

-

-

Метионин

2.25

не детектировался

-

-

Аспарагин

9.59

396

2

66.6

Глутаминовая кислота

10.38

411

4

70.0

Лизин

3.98

632

5

58.9

Аргинин

5.27

не детектировался

-

-

Гистидин

3.72

не детектировался

-

-

Страницы: 1 2 3 4 5


Прочие статьи:

Терминация транскрипции и отделение цепей РНК
Последовательности ДНК, являющиеся сигналами остановки транскрипции, называются транскрипционными терминаторами. Обнаружено два типа сигналов терминации – ρ-зависимый и ρ-независимый терминаторы. Оба они имеют некоторые общие пр ...

Оборудование
· Аналитические весы · Пробирки · Скальпели · Пинцеты · Линейка · Песочные часы · Чашки Петри · Спиртовка · Автоклав · Штатив · Фильтровальная бумага ...

Пластический обмен. Биосинтез белка
Наиболее важным процессом пластического обмена является биосинтез белка. Он протекает во всех клетках организмов. Генетический код. Аминокислотная последовательность в молекуле белка зашифрована в виде нуклеотидной последовательности в м ...

Разделы